微管蛋白（Tubulin）细胞内聚集形成微管（Microtubule），参与细胞分裂、胞内物质运输等多种生理活动，是成功的抗肿瘤药物研究靶标之一。细胞分裂周期5样（CDC5L）蛋白是NTC复合物（Nineteen Complex）的核心蛋白之一，负责RNA剪接体（B^act complex）的激活，参与pre-mRNA剪接过程，在细胞有丝分裂和DNA损伤修复中具有重要作用。CDC5L在多种肿瘤组织内高表达、且与不良预后密切相关，敲低CDC5L显著抑制肿瘤细胞的增殖，使得CDC5L是开发具有RNA剪接调控作用的抗肿瘤药物潜在靶标。然而，现阶段尚无靶向CDC5L的小分子被报道。

熟女性交 王洋教授课题组近年来报道了多种新型微管蛋白聚集抑制剂（J. Med. Chem.2016, 59, 10329; Bioorg. Med. Chem.2017, 25, 6623; Eur. J. Med. Chem. 2018, 144, 817; Eur. J. Med. Chem. 2019, 178, 177; Eur. J. Med. Chem. 2020, 197, 112323; Eur. J. Med. Chem.2021, 214, 113256; Eur. J. Med. Chem.2021, 221, 113531; Bioorg. Chem.2021, 115, 105239; Eur. J. Med. Chem.2022, 236, 114344; Bioorg. Chem.2022, 128, 106112; Bioorg. Med. Chem.2023, 92, 117437; J. Med. Chem.2024, 67, 12118; Eur. J. Med. Chem.2025, 283, 117130），多个优选化合物具有显著的体内外抗肿瘤活性和良好的安全性。

近日，王洋教授课题组在药物化学权威期刊Journal of Medicinal Chemistry发表了题为“Novel Diaryl-substituted Pyrazolo[3,4-d]pyrimidines as Tubulin/CDC5L Dual-targeting Ligands: Discovery, Potent Antitumor Activities and Good Metabolic Stability”的研究论文，报道了首个具有强效抗肿瘤活性和良好代谢稳定性的Tubulin/CDC5L双靶点配体，并阐明了其作用机制。

研究团队在前期工作总结的药效团模型基础上，经分区优化和表型筛选，获得了多个具有良好抗肿瘤活性的化合物，进而引入不同的氨基酸，最终发现了以化合物11i为代表的吡唑并[3,4-d]嘧啶类新型抗肿瘤化合物。11i对多种肿瘤及耐药肿瘤细胞均具有强效的抗增殖作用，而对正常细胞毒性明显降低。机制研究表明，11i显著阻滞细胞有丝分裂进程、诱导细胞凋亡和ROS生成、抑制血管形成。靶标研究发现，11i的微管蛋白聚集抑制活性有所降低（IC₅₀ = 28.6 ± 1.5 μM）。通过Eurofins激酶谱分析，在5 μM浓度下化合物‌对一组参与细胞周期调控的激酶无明显抑制活性。基于生物素探针13a的靶点垂钓，进而结合沉默实验、共定位分析、下拉实验、热稳定性实验以及表面等离子共振分析等发现并验证了另一关键作用靶标——CDC5L。在结肠癌小鼠移植瘤模型中，化合物11i在10和20 mg/kg剂量下可显著抑制肿瘤生长，且对小鼠体重和脏器无明显影响、血液毒性也较低，具有潜在的开发和应用前景。此研究发现了首个Tubulin/CDC5L双靶点配体，为开发具有RNA剪接调控作用、特异性靶向CDC5L的抗肿瘤药物提供了可能。

熟女性交 药物化学系博士生石志贤和硕士生王瑞丰是该论文共同第一作者，熟女性交 王洋教授、上海交通大学转化医学研究院张建明研究员、梁玉茹博士为论文通讯作者。该研究得到了国家自然科学基金和上海市科委重大专项的资助。

原文链接： //doi.org/10.1021/acs.jmedchem.5c00785.